RNA干扰慢病毒平衡株筛选

2021-12-20 05:10:02 来源:
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小分子RNA扰乱新科技是一种特异性地阻断某些遗传物质隐含的研究手段,在、菌株细菌感染,遗传病及其它病因的外科手术中都均有广泛应用。更慢菌株表现形式是一类来源于合并逆转录菌株的表现形式,由于具有可以细菌感染非分裂期与分裂期肝细胞,现有大的外源性用以 遗传物质短片,免疫肝细胞小等特点,现已成转移用以 遗传物质转至哺乳动物肝细胞的单纯表现形式。将更慢菌株表现形式应用于RNA扰乱当中都,可以特异性抑制哺乳动物的各类肝细胞中都遗传物质的隐含,成遗传物质功能研究和遗传物质外科手术的有力手段。迄今为止研究表明更慢菌株表现形式能在哺乳动物各类肝细胞不稳定的隐含siRNA,长期抑制遗传物质隐含。为建立肝细胞模型后续遗传物质外科手术提供者合理的研究手段。

生博迄今为止为投资者选取过几百种遗传物质的扰乱片断,并通过更慢菌株得到几十种不稳定的肝细胞株。为后续研究遗传物质外科手术提供者了合理依据。

BXXX1遗传物质扰乱不稳定的HeLa肝细胞株紧密结合

第一之外:BXXX1扰乱表现形式紧密结合(表现形式pMagic 4.1)

siRNA设计:

MarkergeneGene IDTargetSeqGC%KD1BXXX1NM_XXX4 GCCXXXXXXXXXXXXXGA47.4 KD2BXXX1NM_XXX4GGTXXXXXXXXXXXXXTAT52.6KD3BXXX1NM_XXX4CCAXXXXXXXXXXXXXTTT52.6KD4 BXXX1NM_XXX4GCAXXXXXXXXXXXXXGAA47.4pLVT4NC TTCTCCGAACGTGTCACGT 52.6

第二之外QPCR筛靶实验

Real-time PCR检查结果显示: HeLa肝细胞中都,比起NC组, 四个各种因素中都,KD2,KD4对用以遗传物质BXXX1的隐含的一声减效率降到80%以上,KD3对用以遗传物质BXXX1的隐含的一声减效率也降到50%以上,都是合理各种因素。

第三之外Western blot内源正确性实验报告

Western Blot检查结果

样品说明:

M 为Marker;

1 CON为正常用以空肝细胞(HeLa)样品;

2 NC为正常用以肝细胞(HeLa),加阴性对照菌株细菌感染的肝细胞样品(Negative Control);

3 KD为正常用以肝细胞(HeLa),加RNAi各种因素菌株细菌感染的肝细胞样品(Knock Down)

从Western Blot结果可以看出,KD1,KD2各种因素对HeLa肝细胞BXXX1的隐含有一声减效果,为合理各种因素。

第四之外:扰乱更慢菌株KD1.、对照更慢菌株CMV-GFP-L.V.细菌感染HeLa肝细胞株后选取不稳定的株。

HeLa 白光组 White light荧光组 Fluoresce 稀释度 Day 3, 100× BlankKD1 MOI 10KD1 MOI 20CMV-GFP MOI 10CMV-GFP MOI 20

三、实验总结:

1、HeLa肝细胞细菌感染KD1.更慢菌株,MOI 10、MOI 20时毒性大,死肝细胞多。若只计活肝细胞,细菌感染速度快,都超过80%。

2、HeLa肝细胞细菌感染CMV-GFP-L.V.更慢菌株,MOI 10、MOI 20时细菌感染速度快,都超过90%。

3、传代培养后,最终选取出HeLa- KD1 MOI 10不稳定的株,HeLa- KD1 MOI 20不稳定的株、HeLa- CMV-GFP MOI 20不稳定的株。

编辑: 陈

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